Analysemethode

PCR

Probentyp

Nukleinsäureextrakte aus Abstrichen von Hautläsionen.

Nachweis

Ein 160 bp langes Fragment des RAP94-Gens, das spezifisch für Orthopockenviren ist, wird mit Primern amplifiziert und mit einer R6G-markierten Hydrolyse-Sonde detektiert. Wenn eine Amplifikation stattfindet, ermöglicht der Einschluss der MPXV WA-spezifischen FAM-markierten Sonde die Unterscheidung zwischen MPXV-WA, MPXV-CB und anderen Orthopockenviren durch die Durchführung zusätzlicher Schmelzanalyse. Zur Unterstützung der Interpretation repräsentiert die enthaltene positive Kontrolle MPXV-CB. Schmelzpeaks mit einer höheren Tm repräsentieren MPXV-WA und Schmelzpeaks mit niedrigerer Tm andere Orthopockenviren.

Wellenlänge

PCR Nachweis bei Wellenlänge 580nm

Systeme

• LightCycler® 480 Instrument

• LightCycler® 480 II Instrument

• cobas® z 480 Analyzer (open channel)

• LightCycler® PRO System

Dieses Produkt erlaubt einen Einzel- oder zusammen mit anderen Kits einen Multiplex- Genom-Nachweis aus Total-NA Nukleinsäureextrakten gewonnen aus Proben der Abstrichen von Hautläsionen und ist zur Identifikation und Differenzierung von Orthopockenviren gedacht.

Orthopockenviren (OPXV) sind sehr große (200 nm wie kleine Bakterien), ziegelsteinförmige ds-DNA-Viren mit einem Genom von etwa 200 kb. Sie verursachen fieberhafte Erkrankungen mit auffälligem vesikulärem Ausschlag. Orthopockenviren, von denen bekannt ist, dass sie Krankheiten beim Menschen verursachen, umfassen Pocken, Vaccinia-Virus, Kuhpocken und Affenpocken.

Affenpocken (MPXV) sind eine seltene pockenähnliche Krankheit bei Kindern in Zentralafrika. Typische Anzeichen sind Fieber, Halsschmerzen, Kopfschmerzen und vesikulopustulärer Ausschlag, aber auch Bronchopneumonie und Durchfall. Sie werden in zwei Kladen unterteilt: die Kongo-Basin-Klade (MPXV-CB) und die westafrikanische Klade (MPXV-WA). Kürzlich wurde MPXV-WA in verschiedenen europäischen Ländern und den USA gemeldet.